طريقة تعيين نسبة الكرياتينين في الدم

طريقة تعين نسبة الكرياتينين فى الدم( Jaffe Reaction)
تعتمد هذه الطريقة اللونية( Jaffe Reaction) على تفاعل الكرياتينين (الموجود فى السيرم أو البول) مع حمض البكريك القلوى(Alkalin Picric Acid )فيعطى لون برتقالي محمر0

العينات المستخدمة (Sampls )
يمكن قياس الكرياتينين فى البلازما أو السيرم أو البول(بشرط تجميع بول 24 ساعة للشخص المراد قياس الكرياتينينله)
أولا تقدير نسبة الكرياتينين في الدم :Serum Creatinine
نأخذ من الشخص عينة دم وريدى توضع فى أنبوبة طرد مركزي وتترك حتى تتجلط ثم تدار فى جهاز الطرد المركزي لفصل السيرم أو نستخدم مانع تجلط للحصول على البلازما (فى هذا الأختبار لا يشترط مانع تجلط معين)

فصل البروتين:- Deprotenization
تأتي خطوة فصل البروتين عن السيرم أو البلازما بواسطة مرسب البروتين(حامض ثلاثى كلوريد الخليك .T. C. A ) وهي كالآتى :
نأخذ فى أنبوبة طرد مؤكزي 1 مللترمن السيرم أو البلازما يضاف اليها1 مللترمن مرسب البروتين (.T. C. A ) ثم نرج جيدا نلاحظ تعكرمحتوى الأنبوبة بعد عملية الخلط تدار الأنبوبة فى جهاز الطرد المركزى لفصل البروتين ونحصل من هذه العملية على المحلول الرائق Supernatant الذى يتم تقدير الكرياتينين فيه 0

المحاليل المستخدمة:-Reagents
1- المحلول القياسى تركيز : Creatinine standard 2.0mg/dl
2- حمض البكريك : (color reagent)
3 -هيدروكسيد الصوديوم: (Alkaline reagent)
يتم خلط المحلول 2 و 3 للحصول محلول البكريك القلوى (working solution) الذى يستخدم فى الإختبارمباشرة

طريقة عمل الاختبار :-
نقوم بتحضير ثلاثة أنابيب نظيفة جافة ونميزها بالرموز/ B / S / T /
- الأنبوبةBوهي الخاصة بمحلول البلانك
- الأنبوبةSوهي الخاصة بالمحلول القياسى
- الأنبوبةTوهي الخاصة بعينة الأختبار
ثم نقوم بتنفيذ الجدول الموضح فى الأنابيب بأن نضع 1مللتر من المحلول الرائق فى أنبوبة العينة (T) نضع 5ر0 مللتر من المحلول القياسى فى أنبوبة (S) نضع 5ر0 مللتر من الماء المقطر فى أنبوبة (B) نضع 5ر0 مللتر من ( .T.C.A) فى كل من أنبوبة(ٍS و B ) & نضع 1 مللتر من محلول البكريك القلوى فى الثلاث أنابيب 0 (يجب أن يكون مجموع حجم المحاليل فى الثلاث أنابيب يكون متساوى)
نترك الأنابيب مدة 20 دقيقة قبل عملية القراءة ثم يضبط جهاز قياس الألوان عند طول موجة ( 546nm ) ثم يضبط صفر الجهازعلى محلول البلانك (B) ثمن أخذ قراءة أنبوبة المحلول القياسى (S) وقراءة أنبوبة العينة (T) تسجل القراءة

B S T

1ml ---- ---- المحلول الرائق Supernatant

---- ml.,5 ---- المحلول القياسي Standerd

---- ---- .,5 ml ماء مقطر Dis.water

---- .5 مل .,5 مل T . C . A

1ml 1 ml 1 ml البكريك القلوي working solution

Mix , let stand for exactly 20 min at 20 - 20 c

الحساب :- Calculation

نسبة الكرياتينين فى البلازما = قراءة العينه \ قراءة المحلولالقياسي×2